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HPLC色譜柱的分類及常見故障介紹

發表時間:2022-07-29  |  點擊率:183
HPLC色譜柱(分離柱)是非常重要的部件之一,一般可分為反相柱、正相柱、其他柱三類。
 
①反相色譜柱:它是使用最多的一種色譜柱;一般約占70%;其中,C18柱約占65%;C8柱占15%左右;苯基柱<5%。反相色譜是目前應用得最為廣泛的一種高效液相色譜方法。C18在反相色譜中應用得最為廣泛。大概超過一半。
 
②正相色譜柱:正相色譜柱也經常被使用,它約占20%。
 
③其他色譜柱(手性柱、離子交換柱):約占10%。
 
HPLC色譜柱的常見故障有哪些?
 
1、柱壓過高
可能是微粒堵塞. 柱床膨脹,不可逆吸附, 細菌生長等造成的。也有可能是系統反壓問題, 例如阻尼器堵塞,進樣器堵塞, 管路或連接口堵塞。 在線過濾器不干凈, 壓力傳感器不準確等。
2、柱效低
可能是色譜柱被污染、 過濾片部分堵塞、色譜柱內的死體積造成,例如流動相pH值或者組成不合適造成固定相損失。 流動相急劇變化造成固定相物理損壞, 機械振動造成固定相產生裂縫,柱床收縮或干枯。也有可能是儀器連接的問題, 認真檢查進樣器、檢測器、 管路、 保護柱和在線過濾器等是否連接好,也可能是色譜柱沒有平衡好, 進樣量過大等問題。
3、重復性差、不出峰、回收率低
可能是色譜柱被污染, 流動相 pH值或者組成不合適造成固定相損失 , 樣 品溶劑 不同或樣品本身不穩定, 固定 相極性過強或者流動相極性過弱. 或者發生非特異性吸附。也可能梯度實驗時平衡時間不足,溫度波動, 流動相組成改變, 樣品溶劑不同, 樣品穩定性不好,方法的開發不好, 緩沖液的酸堿度不合適或者緩沖能力不足。
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